Desarrollo de un mecanismo basado en el protocolo de tinción de ADN usando el ácido nucleico mancha naranja Sytox ... - Resumen - Europa PMC

Química Admin Diciembre 21, 2016 0 556
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La detección de fragmentos individuales de ADN por citometría de flujo de tamaño fragmento de ADN (FSFC) depende de la tinción precisa, estequiométrica de las moléculas de ADN de la colorante intercalante. En este estudio, se determinó las características de unión de un colorante en el nm de longitud de onda 532 excitables disponible en el mercado y utilizamos esta información para desarrollar un protocolo universal para la tinción de ADN ADN FSFC usando una frecuencia compacta duplicado Nd: fuente de excitación láser YAG. En doce 532 nm de longitud de onda de colorantes-excitable, la tinción de ácidos nucleicos probado, Sytox naranja mancha mostró la intensidad de fluorescencia más alta con un gran aumento en la fluorescencia mediante la unión a ADN de doble cadena (alrededor de 450 veces). Además, el uso de cloruro Sytox Orange, precisos histogramas fragmento de tamaño de distribución se obtuvieron constantemente, independientemente de la base par colorante de tinción ratio (tinte / pares de bases). Un modelo que describe dos modos de unión, intercalación (primaria, fluorescencia rendimiento) y absorbente (secundaria externa, con la participación extinción de la fluorescencia), se propuso para interpretar el rendimiento de los tintes bajo diferentes proporciones de tinte / pares de bases. La constante de equilibrio de disociación del secundario se encuentra que es el parámetro más crítico en la determinación de la sensibilidad de cada fluoróforo a la tinción relación de tinte / pares de bases. Las medidas de las dos constantes de disociación de equilibrio proporcionado un marco teórico para el desarrollo de un protocolo universal que se ha demostrado con éxito en una amplia gama de concentraciones de ADN en el citómetro de flujo equipado con diodo compacto, de estado sólido de doble frecuencia bombeado a , Nd: YAG para la reducción rápida y significativa de ADN.
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