La comparación entre los tres métodos de tinción en frío en el diagnóstico de la tuberculosis primaria: un estudio piloto

Química Admin Noviembre 18, 2016 0 25
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ARTÍCULO ORIGINAL

comparación Entre tres métodos de tinción fríos en el diagnóstico primario de la tuberculosis: un estudio piloto *, **

Soham GuptaI; Vishnu Prasad ShenoyII; Indira BairyIII; Sethumadhavan MuralidharanIV;

ISenior investigador. Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina de San Juan, Bangalore, India
Profesor del grado de IISelection. Departamento de Microbiología, Kasturba Medical College, Manipal, India
IIIHead. Departamento de Microbiología, Kasturba Medical College, Manipal, India
IVHead. Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina de San Juan, Bangalore, India

coincidente

RESUMEN

OBJETIVO: En los países en desarrollo, la microscopía de esputo es la principal herramienta para la detección de casos de tuberculosis pulmonar. El objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia diagnóstica de la tinción de Gabbett (GS) y la tinción frío modificado (MCS), que son ambos métodos en dos etapas, en comparación con la de la tinción fluorescente (FS), que es un método -Step tres para la detección de AFB en frotis de esputo.
MÉTODOS: Nuestra muestra incluyó 260 muestras de esputo recogidas de individuos sospechosos de tener tuberculosis pulmonar en el Hospital Kasturba en Manipal, India. Los frotis se prepararon por triplicado: una para FS, MCS, y GS. Los puntos fueron numerados de manera aleatoria para que el examinador se desconocía la identidad de las muestras.
RESULTADOS: De las 260 muestras, 16 (6,15%), 15 (5,77%), y 13 (5,00%) mostraron resultados positivos con AFB FS, MCS, y GS, respectivamente. La sensibilidad de la GS y MCS, en comparación con la de la FS, fue 81,25% y 93,75%, respectivamente. La concordancia de GS y MCS con FS era bueno (0,988 y 0,996, respectivamente), y se encontraron diferencias estadísticamente significativas.
CONCLUSIONES: Aunque se encontraron MCS y GS sea menor que FS era sensible, que es evaluada por microscopía de fluorescencia, los dos primeros son los métodos prometedores para el diagnóstico de la tuberculosis.

palabras clave: la tuberculosis , pulmonar; técnicas y procedimientos de diagnóstico; Microscopía de fluorescencia; Esputo.

introducción

La tuberculosis es una enfermedad de gran importancia en los países en desarrollo, como la India, donde causó una considerable morbilidad y mortalidad. El control de la tuberculosis se define como la reducción de su transmisión, lo que reduce la morbilidad y la mortalidad, y cualquier datos de eventos es muy importante para mantener este control. Microscopía de esputo sigue siendo la principal herramienta para la investigación de casos en los países en desarrollo. (1-6)

En la India, el método de Ziehl-Neelsen (ZN) es el procedimiento recomendado en las directrices revisadas del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis (RNTCP). (7) Sin embargo, el método es engorroso y ZN plantea varios problemas de funcionamiento, ya que requiere la aplicación de calor durante la tinción. (1,2,6)

Para la correcta ejecución de un programa de control de la tuberculosis, así como para superar los problemas asociados con el método de Z-N, se ha buscado durante mucho tiempo mejoras y simplificaciones. Se evaluaron varios métodos de tinción frío, y algunos han mostrado resultados prometedores. (1-6,8,9) de la tinción Gabbett (GS) y, más recientemente, la tinción frío modificado (MCS) se han puesto como técnicas de tinción alternativos, ya que no requiere una fuente de calor durante la coloración y eliminar la etapa de blanqueo . (1,2,6,8,10) del método fluorescente de tinción (FS, evaluada bajo el microscopio de fluorescencia), que es también un método de tinción frío, es un método rápido y fiable para la detección de AFB y se encontró para ser más sensible que es el método de ZN. (3-5,11,12)

El objetivo de este estudio fue evaluar comparativamente la eficacia diagnóstica de estos tres métodos de tinción de frío en la detección de AFB.

métodos

Nuestra muestra incluyó 260 muestras de esputo recogidas de individuos sospechosos de tener tuberculosis pulmonar en el Hospital Kasturba, que se encuentra en la ciudad de Manipal, India. Los puntos de cada muestra se prepararon por triplicado; cada uno de FS, GS, y MCS.

Para la preparación de frotis sometiendo FS, las muestras de cada muestra se secaron al aire y se fijaron para el calor. Las láminas fueron inundados con recién filtrada auramina-fenol (0,3 g de auramina y 3 ml de fenol en 97 ml de agua destilada) durante 7-10 minutos sin calefacción. Los frotis se lavan en agua corriente y se decoloró con una solución de ácido / alcohol 3% durante 3-5 min. Los portaobjetos se lavaron en agua corriente y con un contraste de la solución de permanganato de potasio 0,1% durante 1 min, seguido de lavado y secado al aire. (13)

Para la preparación de frotis sometiendo GS, las muestras de cada muestra se secaron al aire y se fijaron para el calor. Las láminas fueron inundados con 1% mancha carbol fucsina (10 g de fucsina básica, 100 ml de alcohol desnaturalizado, y 50 g de fenol), y se añadió agua destilada para hacer un volumen final de 1000 ml. Esto se dejó reposar a temperatura ambiente durante 10 min. A continuación, los frotis se lavan en agua corriente y para el contraste con Gabbett azul de metileno (1 g de azul de metileno, 20 ml de ácido sulfúrico, 30 ml de absoluto y 50 ml de agua destilada, alcohol) para 2 min. Diapositivas luego fueron lavados y secados al aire. (1)

Para la preparación de frotis de ser sometido a la MCS, las muestras de cada muestra se secaron al aire y se fijaron para el calor. Las diapositivas fueron inundadas con tinción fenicada magenta, como GS, durante 5 minutos. A continuación, los frotis se lavan en agua corriente y de contraste con un medio de contraste decolorante cambiado (0,25 g de azul de metileno, 25 ml de alcohol absoluto, 10 ml de glicerol, 0,01 g de hidróxido de potasio, 4 , se añadieron 5 ml de ácido acético glacial, y 3 ml de ácido clorhídrico), y agua destilada para hacer un volumen final de 100 mL. Esto se dejó reposar a temperatura ambiente durante 3 min. a continuación, los portaobjetos se lavan y se secan al aire. (6)

Los puntos por triplicado de cada muestra (FS, GS, frotis y MCS) se contaron de manera aleatoria para que el examinador se desconocía la identidad de la muestra, excluyendo así el sesgo selectivo. Todos los frotis fueron leídos por un examinador experimentado, en aceite de inmersión para microscopio GS y MCS y microscopía de fluorescencia con un objetivo de x40 para FS (Leica, Wetzlar, Alemania). Las manchas fueron leídos y clasificados como 3+, 2+, 1+ bajo o negativo, de acuerdo con las directrices RNTCP. (7,13) Después de que las manchas habían sido leídos, los resultados fueron documentados y, al final del estudio, los resultados se descodifican y se compararon frotis transversal.

resultados

Entre las 260 muestras, 16 (6,15%), 15 (5,77%), y 13 (5,00%) mostraron resultados positivos con AFB FS, MCS y GS, respectivamente. Desde FS mostró el mayor número de resultados positivos, se ha considerado el estándar de oro. frotis positivos fueron confirmados por restaining todos FS frotis con el método Z-N. Los resultados obtenidos con GS frotis y MCS se compararon con los obtenidos con FS, como se muestra en las Tablas 1 y 2.

Todas las muestras que dieron positivo con AFB-GS y MCS también fueron positivos con AFB-FS, mientras que el número de muestras que dieron positivo con AFB-FS pero AFB-negativa con GS y MCS fue, respectivamente, 3 y 1. L '3 muestras de la lectura como AFB-negativa con GS se clasificaron, respectivamente, como 2+, 1+, y escaso con FS, mientras que la muestra se lea como AFB-negativa con MCS se clasificó como 1+ con FS.

En comparación cruzada de GS y MCS con FS, la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo de la SG fueron, respectivamente, 81,25%, 100,00%, 100,00% y 98,79%, mientras que las de MCS eran 93,75%, 100,00%, 100,00% y 99,59%, respectivamente. El acuerdo general de GS y MCS con FS era bueno (0,988 y 0,996, respectivamente). No hubo diferencias significativas entre estos métodos y FS.

Los resultados obtenidos con GS frotis y MCS se compararon. Dos frotis leídos como negativa con GS fueron leídas como positivas (MCS escasas y 1+, respectivamente). La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo de GS en relación con MCS fueron, respectivamente, 86,66%, 100,00%, 100,00% y 99,19%. Hubo una buena concordancia general entre los dos métodos (0992), y no se encontraron diferencias estadísticamente significativas.

discusión

La tuberculosis es un problema grave de salud pública, y su control se ha convertido en un reto en los países en desarrollo, como la India. (14) descubrimiento caso es muy importante para el control de la enfermedad y se consigue principalmente por microscopía de frotis de esputo. A pesar de que la cultura se considera el estándar de oro, que necesita un entorno de laboratorio adecuado y toma más tiempo, por lo que su uso práctico en los entornos con pocos recursos.

En la India, de acuerdo con las directrices RNTCP, el método de ZN se lleva a cabo en las instalaciones de atención primaria de salud. (7) Sin embargo, el método de ZN plantea problemas, tales como la necesidad de un suministro regular de líquido gas espíritu / petróleo, que se utiliza para la calefacción. También 'un procedimiento engorroso y puede ser peligroso. Se han hecho varios intentos para desarrollar una técnica de tinción frío omitir la etapa que implica el calentamiento de carbol-fucsina. (1,2,6)

En la actualidad, la microscopía de fluorescencia parece ser una herramienta eficaz, rápida y fiable para la detección de casos y es más sensible que el método es Z-N. Es también más fácil de realizar, (3-5,11,12) pero el coste-efectividad de esta técnica debe ser considerado, ya que tiene altos costos de mantenimiento, incluido el de la lámpara de mercurio de presión ultra elevada.

Varios dos etapas de métodos de tinción en frío, en el que se omitió la etapa de calentamiento y los pasos se combinaron blanqueo y el contraste, se evaluaron. (1,2,8,10) Entre estas técnicas, GS ha ganado aceptación universal, y MCS ha mostrado resultados prometedores en comparación contra ZN. (6)

En este estudio se evaluaron GS y MCS, comparándolos con FS. Con FS, AFB aparecen barras fluorescentes de color amarillo brillante tan delgada, está claramente recortada contra un fondo oscuro. Con los otros dos métodos, AFB aparecen como imágenes delicadas que representan más de cerca a su morfología original, pero son más débiles, lo que podría explicar los resultados negativos falsos. Sin embargo, no podemos ignorar la posibilidad de que FS también produjo resultados falsos positivos, ya que la cultura no se ha realizado. Por lo tanto, para excluir resultados FS falsepositive, todos los frotis FS se restained con el método Z-N.

En nuestro estudio, hemos obtenido unos resultados más positivos con FS. Sin embargo, un estudio realizado en Tailandia mostró mejores resultados con GS con FS. (8) A pesar de que el MCS es FS menos sensibles, MCS fue más rápido (<10 min) y mostró una mejor sensibilidad en el hecho de GS. En términos de costes, existe una diferencia insignificante entre GS y MCS, pero FS es más caro que son los otros dos métodos, debido a sus costes de mantenimiento y de la lámpara. Por otra parte, se comprobó la preparación de frotis con SQM ser realizado fácilmente; cualquier laboratorio de referencia capaz de preparar reactivos y distribuirlas a los laboratorios periféricos. Además, el MCS es considerablemente más rápido que es GS y FS, lo que permite más tiempo para ser gastado para el examen de frotis.

La correlación entre los tres métodos de tinción frías evaluados aquí era bueno, y no hubo diferencias estadísticamente significativas. Encontramos el MCS para ser más rápido, menos costoso y más fácil de realizar. Por lo tanto, este método puede considerarse como una herramienta prometedora para los resultados de la investigación en los casos de campo. Otros estudios deben llevarse a cabo con el fin de establecer y evaluar una técnica de tinción fiable que es adecuado para su uso en entornos de escasos recursos en los países en desarrollo.

referencias

1. Gokhale S, S Qadir, JS Nagra, AK Chakraborty. La eficiencia del método de tinción frío de AFB en comparación -a esputo con el método de Ziehl Neelsen en condiciones de campo. Indian J Tuberc. 1990; 37 (3): 135-7. [Enlace]

2. Selvakumar N, M Gomathi, Rehman F, Narayanan PR. Evaluación de un método de tinción en frío de dos reactivos para la detección de bacilos acidorresistentes. Int J Tuberc pulmón Dis. 2002; 6 (8): 728-31. [Enlace]

3. Ulukanligil M, Aslan G, S. Tasci un estudio comparativo de los diferentes métodos de tinción y el número de muestras para la detección de los bacilos ácido. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2000; 95 (6): 855-8. [Enlace]

4. Ziaee M, M Namaei, Khazae M, Azarkar G. compara los valores de dos tinción de esputo diferente para el diagnóstico de bacilos ácido. Irán J Clin Inf Dis. 2008; 3 (2): 99 102. [Enlace]

5. Un Jain, Bhargava A, SK Agarwal. Un estudio comparativo de dos técnicas de tinción de uso general para bacilos ácido en muestras clínicas. Indian J Tuberc. 2002; 49 (3): 161-2. [Enlace]

6. Gupta S, V Prasad, Bairy I Muralidharan S. evaluación comparativa de los dos métodos de tinción en frío con el método de Ziehl-Neelsen para el diagnóstico de la tuberculosis. Sureste de Asia J Trop Med Salud Pública. 2009; 40 (4): 765-9. [Enlace]

7. TBC India [página web en Internet]. Nueva Delhi: Ministerio de Salud y Bienestar de la Familia [citado de 2008 3 DEC]. para el manual de técnicos de laboratorio. [. Adobe Acrobat, 76P] Disponible en: http://www.tbcindia.org/pdfs/Module%20for%20Laboratory%20Technician.pdf [Enlace]

8. Tansuphasiri U, Kladphuang B. Evaluación de la tinción de esputo con el método modificado frío y la comparación con la tinción de Ziehl-Neelsen y métodos de tinte para el diagnóstico primario de la tuberculosis. Sureste de Asia J Trop Med Salud Pública. 2002; 33 (1): 128-35. [Enlace]

9. Rao KP, Naganathan N, Nair SS. Un método de tinción para bacilos tuberculosos fría con cloroformo. Indian J Tuberc. 1966; 14: 3-9. [Enlace]

10. Ruben J, inventor. Manchar para bacilos ácido-alcohol resistentes. patente US 4857459. 1989 15 de agosto [Enlace]

11. Kumar R, M Agarwal, M. Prasad demostración de bacilos ácido en el esputo. Indian J Tuberc. 1979; 26 (1): 17-20. [Enlace]

12. Ba M, Rieder HL. Una microscopía de fluorescencia comparación con la técnica de Ziehl-Neelsen en el examen de esputo para bacilos ácido-alcohol resistentes. Int J Tuberc pulmón Dis. 1999; 3 (12): 1101-5. [Enlace]

13. TBC India [página web en Internet]. Nueva Delhi: Ministerio de Salud y Bienestar de la Familia [citado 2009 29 sep]. Manual para la microscopía de esputo de fluorescencia. [. Adobe Acrobat, 16p] Disponible en: http://www.tbcindia.org/pdfs/Flourescence_Microscopy%20Manual.pdf [Enlace]

14. Control de V Rao G. Tuberculosis: Situación actual y retos. RMRCT actualización. 2007; 4 (2): 1-4. [Enlace]

Correspondencia a:

soham Gupta Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina de San Giovanni
Bangalore, 560034, Karnataka, India
Tel 91 80 2206-5052
E-mail: soham.micro@gmail.com

Enviado: 23 de enero de 2010.
Aceptado, después de la crítica: 10 de mayo de 2010.
El apoyo financiero: No.

* Estudio organizada por el Departamento de Microbiología, Kasturba Medical College, Manipal, India.
** Una completa versão em português deste artigo this disponível em http://www.jornaldepneumologia.com.br

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